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JC-1

CAS:No.3520-43-2

英文名称:JC-1

分子式:C25H27Cl4IN4

分子量:652.23

储存条件:Powder:-20℃,1 year;Insolvent(母液):-20℃,6 months;-80℃,1 year

纯度:HPLC≥95%

JC-1
小分子同系列4赠1
货号:
IJ0300
品牌:
Solarbio
SKU 北京总部 北京海淀 武汉 广州
IJ0300-1mg 咨询 咨询 咨询 咨询
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是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψ m 的理想荧光探针。在线粒体膜电位较高时,JC-1 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-1 不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-1 为单体,可以产生绿色荧光。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用JC- 1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。


操作步骤(仅供参考): 

阳性对照:

CCCP(10mM )推荐按照 1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至 10μM , 处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常 10μM CCCP 处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经 JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。 



悬浮细胞: 

(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。 

(2)加入 0.5mL 1~5μg/mL JC-1 工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育 20 分钟。 

(3) 37℃孵育结束后,600g,4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。 

(4)用提前预冷的PBS或其它适当溶液洗涤 2 次:重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~ 4 分钟,沉淀细胞,弃上清。

(5)再用适量PBS或其它适当溶液重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分 光光度计检测或流式细胞仪分析。


贴壁细胞: 

注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,可以先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。 

(1)对于六孔板的一个孔,吸除培养液,根据实验需求可以用 PBS 或其它适当溶液洗涤细胞一 次,加入 1mL 细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。 

(2)加入 1mL 1~5μg/mL JC-1 工作液,充分混匀。细胞培养箱中 37℃孵育 20 分钟。 

(3)37℃孵育结束后,吸除上清,用提前预冷的PBS或其它适当溶液洗涤 2 次。 

(4)加入 2mL 细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。 

(5)荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。 


纯化的线粒体: 

(1)0.9mL 0.2~1μg/mL JC-1 工作液中加入 0.1mL 总蛋白量为 10~100 μg 纯化的线粒体。 

(2)用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描(time scan),激发波长为 485nm ,发射波长为 590nm 。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为 485nm 时,可以在 475~520nm 范围内设置激发波长。

(3)用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 。 


荧光观测和结果分析:

检测 JC-1 单体时可以把激发光设置为 490nm ,发射光设置为 530nm ;检测 JC-1 聚合物时,可以把激发光设置为 525nm ,发射光设置为 590nm 。 

注意:此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在最大激发波长和最大发射波长。如使用荧光显微 镜观察,检测 JC-1 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置,如观察 GFP 或 FITC 时的设置;检测 JC-1 聚合物时可以参考观察其它红色荧光,如碘化丙啶或 Cy3 时的设置。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降, 并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。 


注意事项: JC-1 探针装载完并洗涤后尽量在 30 分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。 


使用本产品的案例(仅供参考

The normal human fetal hepatocyte cell line/L-02(10 μg/mL JC-1, 37°C; PBS重悬

L-02 cells were cultured in 6-well plates (1 × 105 cells/well) for 24 h, and then they were incubated with 200 μM H2O2 for 2 h. Then, the cells were separately incubated with the samples at different concentrations (2.5,5 μM) for 3 h in the dark at 37 °C. ubsequently, the cells were stained by fresh JC-1 (10 μg/mL, 37 °C). After that, the L-02 cells were collected and resuspended in PBS buffer. The fluorescence signals of cells were analyzed by flow cytometry (EX = 488 nm green signal, EM = 570−600 nm red signal).

来源文献:Ma H, Zhao J, Meng H, Hu D, Zhou Y, Zhang X, Wang C, Li J, Yuan J, Wei Y. Carnosine-Modified Fullerene as a Highly Enhanced ROS Scavenger for Mitigating Acute Oxidative Stress. ACS Appl Mater Interfaces. 2020 Apr 8;12(14):16104-16113. doi: 10.1021/acsami.0c01669. Epub 2020 Mar 24. PMID: 32186840.

















备注:
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

实验图
暂无详情
Tian Y, et al. Neurotherapeutics. 2020 Oct;17(4)1796-1812.
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