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CAS:No.109244-58-8
英文名称:Dihydrorhodamine 123
分子式:C21H18N2O3
分子量:346.38
储存条件:Powder:-20℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
纯度:HPLC≥95%
Dihydrorhodamine 123（二氢罗丹明123，DHR 123）是罗丹明123的还原形式，是一种常用的荧光线粒体染料。二氢罗丹明123本身是不发荧光的，它能够很容易穿透细胞膜进入细胞，并被细胞内的氧化性物质或氧化还原系统氧化成可发荧光的罗丹明123，后者聚集在线粒体膜上，发射亮绿色荧光（Ex/Em=500/536 nm）。单一的一氧化氮（NO），超氧化物，或过氧化氢（H2O2）不能氧化二氢罗丹明123，但是，当这些活性氧物质与其他细胞组分比如细胞色素c氧化酶或Fe2+联合起来能够氧化DHR 123生成罗丹明123。荧光信号可以通过荧光计，流式细胞仪或荧光显微镜检测。
二氢罗丹明123可用于检测活性氧（ROS），包括超氧化物（在过氧化物酶或细胞色素c存在下）和过氧亚硝酸盐。二氢罗丹明123广泛地用于多种细胞，例如人中性粒细胞、肺肿瘤SPC-A-1细胞、内皮细胞、HaCaT 细胞、嗜酸性细胞、鼠肥大细胞、几内亚猪中性粒细胞、软骨细胞、鼠近端肾小管细胞等。
使用方法（仅供参考）
储存液配制
取 1.7mg Dihydrorhodamine 123 粉末用 982 μL DMSO 溶解配 制浓度为 5 mM 的储存液（1000×）。储存液配置的浓度可以根据实验需求进行调整。
建议使用者根据单次用量将溶液分装成小量储存于-20℃，避免反复冻融，注意避光。
工作液配制
用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度（5 μM）， 充分混匀。具体的工作液浓度要根据实验需要进行调整和配置。
【注意】：实验过程中控制好总体稀释倍数，DMSO 在培养液中的浓度不能超过 0.1%，以避 免 DMSO 对细胞的影响。
贴壁细胞染色
1）选择合适细胞密度接种贴壁细胞，过夜培养。
2）可以选择感兴趣的药物干预细胞，继续培养一定时间。
3）吸去细胞培养液，加入 DHR 123 工作液进行染色。
4）37℃细胞培养箱孵育 15-60 分钟。
5）吸去染色液，用 PBS 洗涤细胞，用荧光显微镜观察。
悬浮细胞染色
1）培养足够量的悬浮细胞（1x106个细胞/ mL）。
2）如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间。
3）离心收集并用 PBS 洗涤细胞。
4）加入 DHR 123 工作液重悬细胞，37℃避光孵育 15 min 或更长时间。
5）用流式细胞仪检测。也可以取细胞悬液制成玻片形式在荧光显微镜下检测。
【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，DHR 123 工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。
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