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活动
> DiO细胞膜绿色荧光探针
DiO细胞膜绿色荧光探针

CAS:No.34215-57-1

英文名称:DiO

分子式:C53H85ClN2O6

分子量:881.7

储存条件:Powder:-20℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year

纯度:≥98%

  ID5570-250120说明书
DiO细胞膜绿色荧光探针
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货号：
ID5570
品牌：
Solarbio
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DiO即DiOC18(3)，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命，可以用标准的FITC滤光片检测。
DiO作为示踪剂或长期示踪剂，被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织。DiO通常不会显著影响细胞的生存力。DiO除了细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附，发育或移植过程中的细胞迁移，通过FRAP（光脱色荧光恢复技术）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
DiO染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。DiO染色强度通常低于DiI，有时在固定组织中会完全丧失。
注：DiO染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。


Di系列染料特点
DiO染料（绿色）活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。
DiA染料（绿色）一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料（橙色）活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料（橘色）一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料（红色）染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。
DiS染料（红色）一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料（深红色）常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

选择建议：DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色


使用方法（仅供参考）
1. 染色液制备
（1）配制储液：储液用DMSO或 EtOH 配制，浓度 1~5 mM。
注：a.未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融；
b.发现较难溶解时可以用超声处理或适当加热以促进溶解。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~30 μM 的工作液。

2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×106/mL。
（2）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。
（3）孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（4）重复步骤（3）两次以上。

3. 贴壁细胞染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。
（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。

4. 结果检测
样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。




In Vitro

Cell（HUVECs，5 μM DiO dye ，20 min at 37℃ in the dark）

In brief, HUVECs were stained with 5 μM DiO dye and 1 μg/mL-1 Hoechst for 20 min at 37℃ in the dark. Then, a solution of 5 μM DiR dye or MitoTrackerTMRed dye was added to the migrasome suspension and incubated for 30 min in the dark.

来源文献：Liu R, Zhang Y, Ge T, Wu H, Ma Y, Ye H, Guo F. Advanced glycation end products promote the release of endothelial cell-derived mitocytosis. FEBS Open Bio. 2025 Apr 8. doi: 10.1002/2211-5463.70035. Epub ahead of print. PMID: 40195952.


备注：
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

实验图
Liu R,,et al.FEBS Open Bio. 2025 Apr 8. doi: 10.1002/2211-5463.70035.
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