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CAS:No.362596-00-7
英文名称:DiD
分子式:C67H103ClN2O3S
分子量:1052.1
储存条件:Powder:-20℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
纯度:≥98%
DiD染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD（远红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激发，有着比DiI（一种常见的细胞荧光染料）更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。
DiD染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。
注：DiD 染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧
光背景较高。
| Di系列染料 | 特点 |
| DiO染料（绿色） | 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 |
| DiA染料（绿色） | 一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。 |
| DiI染料（橙色） | 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。 |
| DiB染料（橘色） | 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。 |
| DiD染料（红色） | 染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。 |
| DiS染料（红色） | 一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。 |
| DiR染料（深红色） | 常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。 |
选择建议：DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色
使用方法（仅供参考）
1. 染色液制备
（1）配制储液：储液用DMSO 或 EtOH 配制，浓度 1~5 mM。（未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。）
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~5 μM 的工作液。
2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×106/mL。
（2）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。
（3）孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（4）重复步骤（3）两次以上。
3. 贴壁细胞染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。
（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。
4. 结果检测
样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
In Vitro
Cell（MNNG/HOS, HUVEC，macrophages，DiD (Ex/Em: 644/663nm）
In Vivo
Mouse（nude mice，DiD (Ex/Em: 644/663 nm）
京公网安备 11011202000391号