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CAS:No.104821-25-2
英文名称:Dihydroethidium
分子式:C21H21N3
分子量:315.41
储存条件:Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(母液):-20℃，6 months;-80℃，1 year
纯度:≥98%
DHE是一种最常用的细胞膜渗透性的超氧化物阴离子（O2-）荧光检测探针。可以直接用于活细胞的氧化活性检测，包括ROS（活性氧）和超氧化物的检测。
DHE进入活细胞后，在超氧化物阴离子作用下脱氢，氧化生成Ethidium。Ethidium可以和DNA结合，产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的乙锭较多，红色荧光就较强，反之则较弱。DHE本身呈蓝色荧光（λEx /λEm：355 / 420nm），直至被氧化为Ethidium，然后嵌入DNA内，使细胞核呈明亮的红色荧光（λEx /λEm：518/605 nm），可用荧光显微镜和流式细胞仪等仪器检测。
DHE是一种可渗透细胞的蓝色荧光探针，是过氧化物指示剂，可用于检测细胞内 superoxide radical anion，能有效地检测活性氧类。这种染料可以自由地进入细胞中，脱氢后成为Ethidium。DHE可以直接用于活细胞的标记。DHE被活细胞摄入后，可以在细胞内的超氧化物阴离子作用下脱氢，产生Ethidium。Ethidium可以和RNA或DNA结合产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时，产生的Ethidium较多，红色荧光就较强，反之则较弱。DHE本身为蓝色荧光，最大激发波长为370nm，最大发射波长为420nm，脱氢后和RNA或DNA 结合产生红色荧光，最大激发波长为300nm，最大发射波长为610nm，实际观察时也可以使用535nm作为激发波长。
一般的，用于细胞内超氧化物阴离子检测时，DHE的常用浓度为1-10μM。
操作方法（仅供参考）
染色方法：
（1）探针溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，以此染色液更换细胞培养液或灌流液； 也可直接向细胞孵育液或灌流液中加入探针至所需浓度。
（2）依据细胞ROS含量的不同，DHE终浓度可选择在1 μM~100 μM的范围，孵育时间可选择10~90 min。孵育可在 37℃或室温进行，要求避光。
（3）孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
荧光显微镜：
（1）对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观 察；对悬浮生长细胞，取25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载 玻片上，再盖上一张盖玻片。
（2）荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的DHE可发出蓝色荧光。
流式细胞仪：
（1）对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 mL冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
（2）采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以 上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。
注意事项
1. DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光保存。
2. 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度， 以观察 ROS 的变化。
使用本产品的案例（仅供参考）
ROS 检测（生菜幼苗根尖；10 mM DHE, 25°C, 10min, 避光； Ex/Em: 488/510 nm）
ROS Measurement（苍蝇的肠道（60 mM DHE，15 min，25 °C）；大脑（60 mM DHE ，25 min，25 °C ）； 避光）
In Vitro
京公网安备 11011202000391号
组织染色步骤?2023-11-15 17:22:35
您好，可以参考产品页面下方操作方法（仅供参考）。