在细胞内，PKC 的激活可以引起下游众多蛋白激酶的磷酸化，形成级联反应，导致多种蛋白的表达，进而引起细胞的活化。PKC 可以在 DAG 和 Ca2+共同作用下被激活。PMA是一种有效的 PKC 激活剂；Ionomycin 是一种有效的，选择性的钙离子载体。PMA常与Ionomycin联用，刺激免疫细胞活化，用于诱导体外细胞培养物产生细胞因子。

       同时，也可加入蛋白转运抑制剂 Monensin (是一种常用的蛋白转运抑制剂，可破坏高尔基体，抑制细胞内的蛋白转运，常用于抑制细胞因子等分泌型蛋白的分泌，使其保留在细胞内。)或 Brefeldin A(是蛋白质运输的特定抑制剂，可以阻断分泌蛋白和膜蛋白从内质网向高尔基体的转运。)，抑制细胞因子外分泌，以准确分析细胞因子的表达水平。如果对分泌蛋白进行免疫检测（例如ELISA、蛋白免疫印迹或多重蛋白检测），则无需使用 Monensin 或 Brefeldin A 对细胞进行处理。

       使用 PMA 和 Ionomycin 进行处理足以诱导许多细胞类型活化，产生细胞因子。BrefeldinA 和 Monensin 可导致内质网和高尔基体中出现分泌性蛋白蓄积。因此，本Kit 可用于体外培养和离体细胞中细胞因子和其他分泌性蛋白的诱导及随后的细胞内检测。对于未刺激的样本，可直接选择 Brefeldin A 和 Monensin（CAT: IK-PTI-1）作为对照。

实验案例（仅供参考）

In Vitro

Cell 

Flow Cytometric Analysis of the Percentages of Th17 Cells.（Spleen Mononuclear Cell/SMC, Thyroid Mononuclear Cell/TMC）

Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA, Solarbio) and Ca-ionomycin (Solarbio) were added into the 12-well plates containing the SMC or TMC suspension, and brefeldin A (BFA, Solarbio) was added after 1 h followed by incubation for 3 h (total stimulation of 4 h). Cells were then collected, washed, and surface stained with APC-labeled CD4 antibody at 4℃ in the dark for 30 min. IC fixation buffer was then added followed by incubation at 4℃ in the dark for 20 min. Finally, cells were washed, resuspended in permeabilization buffer, and stained with PE-labeled IL-17A antibody at 4℃ in the dark for 30 min. Flow cytometric analyses were performed using a FACScanto flow cytometer.

来源文献：Liu H, Li Y, Zhu Y, Ma L, Xue H. Notch Signaling Pathway Promotes Th17 Cell Differentiation and Participates in Thyroid Autoimmune Injury in Experimental Autoimmune Thyroiditis Mice. Mediators Inflamm. 2023 Jan 6;2023:1195149. doi: 10.1155/2023/1195149. PMID: 36643586;PMCID: PMC9839414.