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钙离子探针Fluo-4AM

CAS:No.273221-67-3

英文名称:Fluo-4AM

分子式:C51H50F2N2O23

分子量:1096.94

储存条件:Powder:-20℃,1 year;Insolvent(母液):-20℃,6 months;-80℃,1 year

纯度:≥95%

钙离子探针Fluo-4AM
满3999赠露营车
货号:
IF1500
品牌:
Solarbio
SKU 北京总部 北京海淀 武汉 广州
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Fluo-4 是一种将 Fluo-3 结构中的 Cl 替换成 F 的钙荧光探针。由于将 Cl 替换成了电子吸引力更 强的 F,它的最大激发波长会向短波长处偏离 10 nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长,所 以用氩激光器激发时,Fluo-4 的荧光强度比 Fluo-3 强一倍。 Fluo-4, AM 穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-4,从而被滞留在细胞内, Fluo-4 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的,但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强 的荧光,最大激发波长为 494nm,最大发射波长为 516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞 仪检测细胞内钙离子浓度的变化。 


使用方法(仅供参考): 

  1. 用 HBSS 稀释 Fluo-4, AM 溶液,制备 4-5µM 的 Fluo-4, AM 工作液。

  2. 将 Fluo-4, AM 工作液加入细胞,在 37℃培养 20 分钟。

  3. 加入 5 倍体积的含有 1%胎牛血清的 HBSS,再继续培养 40 分钟。

  4. 用 HEPES buffer saline 洗涤细胞 3 次,然后用 HEPES buffer saline 使细胞重悬浮,制成 1×105 cells/mL 的溶液。

  5. 37℃下培养 10 分钟,然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 506nm,发射波长 526nm。

    *标记的条件因细胞种类而异,在每次实验前,请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。



    注意事项: 1、 如果使用含有血清的培养基,血清中的脂酶会分解 AM 体,从而降低 Fluo-4, AM 进入细胞的效 果。

                      2、含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前,应该尽量去除培养基 残留。

                      3、Pluronic F127 可以防止 Fluo-4,AM 在 HBSS 中聚合并能够帮助其进入细胞。可以向 Fluo-4,AM溶液中加入适量 Pluronic F127 溶液, 但不建议在 Pluronic F127 中长期保存 Fluo-4,AM 溶液。 

                      4、荧光染料均存在萃灭问题,请注意避光,以减缓荧光萃灭。


备注:
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

实验图
暂无详情
Alfhili MA, et al. Toxicon. 2021 Aug;199:41-48. doi: 10.1016/j.toxicon.2021.05.013.
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