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CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)

英文名称:CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

储存条件:4℃密封避光

CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)
货号:
CA1210
品牌:
Solarbio
SKU 北京总部 北京海淀 武汉 广州
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CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)是一种基于WST-8的快速、高灵敏度细胞活性检测的试剂盒,广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜化合物。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同种类型细胞,颜色深浅与细胞数量在一定限度内呈线性关系。

本试剂盒为即用型溶液,无需再行配制,可直接用于96孔板细胞实验,省略了细胞洗涤与收集等步骤。该试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

操作步骤:(仅供参考)

一、制作标准曲线

1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

3.接种后培养至细胞贴壁,然后加CCK-8溶液培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。

4.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

二、细胞活性检测

1.在96孔板中接种细胞悬液(100µL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2.向每孔加入 10µL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5.如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10µL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板在室温条件下避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。

 三、细胞增值-毒性检测

1.在 96 孔板中配置 100µL的细胞悬液。将培养板置于培养箱预培养24小时(在 37 ℃,5% CO2 的条件下)。

2.向培养板加入10µL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段时间(例如:6、12、24或48小时)。

3.向每孔加入10µL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8溶液之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。

4.将培养板在培养箱内孵育1-4小时,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5.如果暂时不测定 OD 值,可以向每孔中加入10µL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算:

细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[ A(0 加药)-A(空白)]×100

A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和 CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项:

1.本试剂颜色应为粉红色,如果发现溶液变黄应弃用。

2.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液。

3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。

4.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间,白细胞可能培养时间较长。

5.当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100µL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500 个/孔 (100µL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

6.如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。

7.培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。


备注:
以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

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