英文名称:CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
储存条件:4℃密封避光
别名 | CCK-8 WST-8 |
英文名称 | CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit |
中文名称 | CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒) |
储存条件 | 4℃密封避光 |
规格 | 100T 500T 1000T 10*500T 10*1000T |
单位 | 盒 |
CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)是一种基于WST-8的快速、高灵敏度细胞活性检测的试剂盒,广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜化合物。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同种类型细胞,颜色深浅与细胞数量在一定限度内呈线性关系。
本试剂盒为即用型溶液,无需再行配制,可直接用于96孔板细胞实验,省略了细胞洗涤与收集等步骤。该试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
操作步骤:(仅供参考)
一、制作标准曲线
1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
3.接种后培养至细胞贴壁,然后加CCK-8溶液培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。
4.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)
二、细胞活性检测
1.在96孔板中接种细胞悬液(100µL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。
2.向每孔加入 10µL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10µL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板在室温条件下避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1.在 96 孔板中配置 100µL的细胞悬液。将培养板置于培养箱预培养24小时(在 37 ℃,5% CO2 的条件下)。
2.向培养板加入10µL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段时间(例如:6、12、24或48小时)。
3.向每孔加入10µL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8溶液之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。
4.将培养板在培养箱内孵育1-4小时,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定 OD 值,可以向每孔中加入10µL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
活力计算:
细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[ A(0 加药)-A(空白)]×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和 CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项:
1.本试剂颜色应为粉红色,如果发现溶液变黄应弃用。
2.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液。
3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。
4.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间,白细胞可能培养时间较长。
5.当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100µL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500 个/孔 (100µL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
6.如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度最高。
7.培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

可以用于贴壁细胞吗?2023-12-29 16:45:38
您好,是可以用于贴壁细胞检测的。
开封后4摄氏度可以保存多久?2023-10-24 21:18:58
您好,该试剂盒可在2-8℃密封避光保存,有效期一年。
100T是多少毫升?2023-08-04 11:08:05
您好,100T是1ml规格。