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核蛋白提取试剂盒


相关信息

别名 细胞核蛋白提取试剂盒
英文名称 Nuclear Protein Extraction Kit
储存条件 附件PMSF-20℃,其它试剂4℃。有效期1年
单位
规格    50T    100T

产品简介: 本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂,释放出胞浆蛋白,再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106Hela细胞或40mg组织)。

规格:50T/100T

产品内容:

试剂盒组成

50T

100T

浆蛋白抽提试剂

25ml

50ml

核蛋白抽提试剂

5ml

10ml

PMSF100mM

300μl

1ml

保存:/浆蛋白抽提试剂4℃保存,PMSF-20 ℃保存。


操作方法:

裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

一、对于体外培养细胞:

1.根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mMPMSF需现用现加,若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸,可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM

2.对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS洗一遍,用细胞刮刀收集细胞,或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化,以免胰酶消化目的蛋白)。500 g离心23分钟收集细胞,吸尽上清留下沉淀备用。

3.对于悬浮细胞:用PBS洗一遍,500 g离心23分钟收集细胞,吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

4.每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl40mg)。

5用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长),必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。

6冰浴10分钟。

7.最高转速剧烈涡旋10秒,4℃ 1200016000g离心10分钟。

8.上清即为抽提得到的细胞浆蛋白,立即吸取上清至预冷的样品管中备用,进行后续的PAGEWestern等实验,但蛋白浓度较低,可根据需要进行相应浓缩。

9.沉淀即为细胞核,要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染),加入50-100μl核蛋白抽提试剂。

10.用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)至沉淀完全分散,冰浴10分钟。

11.最高转速剧烈涡旋10秒,4℃1200016000g离心10分钟。12立即吸取上清至预冷的样品管中,此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。    对于组织样品:    把组织称重后,尽可能切成非常细小的碎片,按每50mg组织加入200μl-500μl PBS,用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液,500 g离心23分钟收集细胞,吸尽上清,收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5

注意事项:

1.裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂干扰,不能用Bradford法测定蛋白浓度,可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号PC0020)测定蛋白浓度。

2.对于组织样品,本试剂盒适用于新鲜组织,对冻存组织抽提效果较差。

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

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