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简述溶菌酶的制备及应用领域

本篇文章由专业生化试剂供应商索莱宝为您提供。

溶菌酶多以蛋清为原料,用于生化研究,临床上用于急慢性咽喉炎、扁平苔癣、扁平疣等疾病的治疗。通常为白色粉末,溶于水,不溶于乙醚和丙酮,最适pH值为6.5。酸性介质中可稳定存在,碱性介质中易失活。

溶解酶的制备:

1. 原料处理:新鲜或冰冻蛋清(或蛋壳水)70kg,用试纸测其pH值,应在8.0左右,经解冻后通过铅筛,除去蛋清中的脐带、蛋壳碎片及其他杂质。

2. 吸附:用冰水冷却并搅拌蛋清,使温度降到5℃,缓缓加入724树脂10kg,搅拌,使树脂完全悬浮在蛋清中。保持温度0-10℃,再继续搅拌5h。将蛋清移入冷库,在0-10℃静置过液。

3. 洗涤、洗脱 隔天把上层蛋清清液倾出,下层用清水洗去附着的蛋白质,先后共洗四次。最后将树脂抽滤去水分,用24kg0.15M磷酸缓冲液(pH6.5)分三次加入树脂搅拌,每次搅拌15min后抽滤去水分。然后用10%硫酸铵18kg,分4次洗脱溶菌酶。合并洗脱液,加入32%(重量/体积)固体硫酸铵使含量达40%,析出白色沉淀。在冷处放置过夜,过滤出沉淀。

4.透析:将沉淀溶解于1.5L蒸馏水中,在冷库内透析24-36h,除去大部分硫酸铵。

5.盐析:透析完毕,将溶液用滤纸过滤,得澄清透析液。用滴管慢慢加入氢氧化钠溶液,使pH上升到8.5-9.0,如有白色沉淀,应即离心除去。然后在搅拌下加入3N盐酸,使溶液pH为3.5。按体积缓缓加入5%固体氯化钠,生成白色沉淀。在0-10℃冷库放置48h,抽滤得到溶菌酶沉淀。

6.干燥沉淀内加入10倍量0℃无水丙酮,搅拌使颗粒松细,在冷处静置数小时,滤去丙酮。沉淀用五氧化二磷真空干燥,即得口服或外用溶菌酶粉剂原料。如不用丙酮脱水,可将溶菌酶透析液冷冻干燥可得不含氯化钠的溶菌酶成品。按蛋清重量计,收率0.1%。

溶解酶的应用领域:

1.溶菌酶是一种无毒、无副作用的蛋白质,又具有一定的溶菌作用,因此可用作天然的食品防腐剂。现已广泛应用于水产品、肉食品、蛋糕、清酒、料酒及饮料中的防腐;还可以添入乳粉中,使牛乳人乳化,以抑制肠道中腐败微生物的生存,同时直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖。

2.溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素,具有多种药理作用,它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效,医用溶菌酶其适应症为出血、血尿、血痰和鼻炎等。

3.溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能,以此酶处理G+细菌得到原生质体,因此,溶菌酶是基因工程、细胞工程中细胞融合操作必不可少的工具酶。

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